人腎近端小管上皮細胞

實驗操作步驟：  公司產品僅用于科研，不得用于臨床．
a．采用認可的方案處死嚙齒動物。    
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。  
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一

細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

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細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
注意事項：
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2司盤85shēng huà shì jì容量：1克

hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人類外周血CD14+單核細胞團塊單一來源，預選型 > 1 mio.cells 人脊髓星形膠質細胞RNAHA-sp miRNA5 μg蔗糖酶 Invertase 9001-57-4 250MG 通用試劑

CM-M010小鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養基100mL異數李速 Isorhcmnqtin 480-19-3

KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Theophylline1,3-二甲基2KU高，98%

腎系膜細胞培養基MCM555-06-6對基本鈉4-AMINOBENZOIC ACID wo7ium SALT
CRP Others Rat 大鼠 CRP / C-reactive 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸粘桿菌素(標準品)Colistin Sulphate質量規格：效價測定

HMF 人肌肉組織來源細胞鹽酸依氟鳥氨酸Eflornithine HCl質量規格：>98%,水合物

CM-R019大鼠腮腺細胞*培養基100mL色甘酸鈉Cromolyn 質量規格：>99%,USP32,BR,可用于細胞培養

RBE, 人肝膽管癌細胞色甘酸鈉（標準品）Cromolyn 質量規格：HPLC>98%,標準品

EB病毒轉化的人B細胞;KMY1022 人神經星形膠質細胞*培養基 100mL環孢菌素,環孢素A,環孢霉素ACyclosporine A質量規格：>98.5%,BR，可用于細胞培養
人腎近端小管上皮細胞CRP Others Human 人 CRP / C-Reactive Protein 人細胞裂解液 (陽性對照) 異香草醛(>98%,BR)質量規格：>98%,BRIsovanillin

AsPC-1 人轉移胰腺腺癌細胞異香草醛(標準品)質量規格：>99%,標準品Isovanillin

HuH-6人肝母細胞瘤細胞 HuH-6 human hepatoblastoma cell DMEM+10% FBS氧化鑭(>99%,EP)質量規格：>99%,EPLanthanum(III) oxide

BMP2 Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 BMP-2 / BMP2A 蛋白氯化鎂六水(分子生物學)質量規格：>99%,分子生物學級Magnesium chloride, hexahydrate

人腎臟上皮細胞(HREpiC)( 5×105 ) MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse醋酸錳四水質量規格：>98%,BCManganese (II) acetate, tetrahydrate
公司細胞現貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。公司產品僅用于科研，不得用于臨床

腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

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冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個； 
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；
細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

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細胞凍存：
對培養的細胞進行凍存的最佳方法是將細胞置于含有(DMSO)等冷凍保護劑的*培養基中于液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養基的冰點，并可減緩冷卻速度嗎，大大降低冰晶形成的危險  (冰晶可損傷細胞，導致細胞死亡)。
注：DMSO 可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時，應采用與此類物質安全危害相適應的設備和操作規范，并應按照當地法規處置此類試劑。 
細胞凍存指導原則
凍存細胞系以備將來之用時，必須遵守以下原則。與其他細胞培養操作一樣，我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明，以便獲得最佳結果。 
1）在高細胞濃度情況下進行培養細胞的凍存，并且細胞傳代次數盡可能少。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意最佳凍存條件取決于所用細胞系。 
2）細胞應緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3）必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑
4）將冷凍的細胞于 -70°C 以下溫度儲存；溫度高于 -50°C 時，冷凍的細胞將開始變質。 
5）必須使用無菌凍存管儲存冷凍的細胞。裝有冷凍細胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內保存 
6）必須穿戴個人防護設備。 
7）所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無菌狀態。必須采用正確的無菌技術，并且在層流通風櫥內進行。

實驗操作：
1、培養瓶預包被。試驗前一天預包培養瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%麻醉，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除血管外部的洗滌液澄清，用無菌鑷子剝去外膜面的殘留組織。PBS洗滌凈。
4、除去內皮細胞：將血管縱向剪開， 內膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內膜層4-5遍，去掉內皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內膜的血管，繼續刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養液重懸，染色計數細胞。
9、培養細胞密度：調整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養瓶。
10、培養：放置于37℃，5% CO2培養箱中。
色素細胞生長生長添加物MelGSPCRMARKERWITHLOADINGDYEPCR Marker, 含上樣緩沖液生物技術級500 lFrozen

RSPO1 Others Human 人 RSPO1 / R-Spondin-1 (aa 1-146) 人細胞裂解液 (陽性對照) (1R)-(+)- (1R)-(+)-cLPHc-PINqNq 7782-70-8

CSSTH1 中華鱉心肌來源細胞典化 Lqcd(II) iodidq 10101-63-0

T-107B中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL1,2,4,5-本四甲羧酸二酐，英文名或英文縮寫：PMDA，級別：BR，99%，規格：25克

RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞24589-78-4N-甲基-N-(基硅烷基)三扶乙酰胺N-metxyl-N-(trimetxylsilyl)trifluonoeetemi7e
Ski細胞，人上皮細胞癌 人急性細胞白血病T細胞,CCRF-CEM細胞 大鼠小腸隱窩上皮細胞;IEC-6乙酸二丙基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]IPC-DPAA (ca. 0.5mol/L in Water)質量規格：用于液相色譜-質譜的離子對試劑

BNL CL.2(小鼠胚胎肝細胞) 5×106cells/瓶×2乙酸二戊基銨(約0.5mol/L水溶液)[離子對色譜級]IPC-DAAA (ca. 0.5mol/L in Water)質量規格：用于液相色譜-質譜的離子對試劑

CPB1 Others Human 人 CPB1 / PCPB 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酸二己基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]IPC-DHAA (ca. 0.5mol/L in Water)質量規格：用于液相色譜-質譜的離子對試劑

中國倉鼠肺細胞;V791-辛烷磺酸鈉[離子對色譜級]IPC-ALKS-8質量規格：離子對色譜用試劑

CALU Others Human 人 CALU / Calumenin 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-壬烷磺酸鈉[離子對色譜級]IPC-ALKS-9質量規格：離子對色譜用試劑
人腎成纖維細胞CL-0206SGC7901(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2草酸銨(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate質量規格：98~101%,BR

MLF, 小鼠成纖維細胞5'-單1酸腺苷(>95%，BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid質量規格：>95%，BR

Sars結構蛋白表達株;293sars181A 人膀胱上皮細胞*培養基 100mL硫酸鋁十六水(>98%,BR)Aluminum sulfate, hexadecahydrate質量規格：>98%,BR

人急性早幼粒白血病細胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脫氫酶，硫酸銨懸浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase質量規格：酶活>200 NADP units/mg，BC

PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml，BC)Malate dehydrogenase質量規格：>12,000U/ml，BC