抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒微量法

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

2 ug pHY43 pHY43 低溫運輸，-20℃保存

鈉瓊脂基礎 NaHCO3 Agar Base 250g

1瓶 JEG-3細胞株 JEG-3 低溫運輸和保存

2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋 2.5L Round bottom vertical anaerobic culture bag 10個/包

200µg RecA蛋白 RecA -20℃保存

500mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.2M,pH7.6  Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH7.6  常溫保存

1 管 KM 71酵母菌 KM71 Yeast Strain -80℃保存

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (TSB)（顆粒）  250g

50mL RNA洗脫液 RNA Elution Buffer 常溫

2 ug pCMV6-AC-GFP pCMV6-AC-GFP 低溫運輸，-20℃保存

溴甲紫葡萄糖瓊脂 Bromcresol Purple Dextrose Agar 250g

抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒微量法SPDYA  細胞周期G2/M期快速誘導蛋白SPDYA抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-rabbit IgG/AP  堿性磷酸（AP）標記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Wnt6  信號通路Wnt6抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgM/AP  堿性磷酸（AP）標記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml

GCN2  蛋白激GCN2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPRMT1  蛋白質(zhì)甲基轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.1ml

KLF8/KLF3  KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體 規(guī)格: 0.1mlHeparanase  乙酰肝素抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540)  磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMAPK organizer 1/Morg1  絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

ANGEL1  ANGEL1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Goat IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

BRP44  腦蛋白44抗體 規(guī)格: 0.2mlFbx15  Fbx15蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-p90RSK(Ser380)  磷酸化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400)  磷酸化絲裂原活化蛋白激激8抗體 規(guī)格: 0.1ml

IL-14/Taxilin alpha  白介素14抗體 規(guī)格: 0.1mlDACH2  轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-P53(Ser46)  磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml

FAM96B  FAM96B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlIGFBP1  胰島素樣生因子結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

SCYLV  甘蔗SCYLV抗體 規(guī)格: 1mlPhospho-Tuberin/TSC2(Ser664)  磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml